双荧光素酶报告基因检测

　　实验介绍 荧光素酶报告基因系统是以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧合虫荧光素，在荧光素氧化的过程中，会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪或液闪测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。通过荧光强度可以反映出荧光素酶基因的表达强弱。

 

　　    通过使用不同的载体，本实验可以用来进行启动子分析、反式作用因子相关实验，也可以用来测定micRNA对目的基因的调控作用。

 

　　    启动子或反式作用因子相关实验可以用连接目的序列的pGL3与pRL-TK共转染来实现；micRNA对目的基因的调控作用可以用micRNA与连接相应序列的psiCheck2质粒共转染来实现。

 

　　服务项目

 

　　服务流程1、启动子相关实验流程

 

　　确定实验分组，并根据实验目的选择工具细胞或者是目的细胞

 

　　如果选取目的细胞，则用荧光质粒进行转染预实验，确定最适转染条件

 

　　将pGL3与pRL-TK按不同比例共转染，并进行荧光素酶报告基因检测，确定两种质粒的最适比例

 

　　按照设计的实验分组和摸索的最适载体比例进行正式转染实验

 

　　(可选)培养24h后按照实验方案加入相应的反式作用因子刺激

 

　　继续培养24h后，进行双荧光素酶报告基因检测。

 

　　结果处理，最终提供详细实验报告。

 

　　2、micRNA对目的基因调控研究实验流程

 

　　确定实验分组

 

　　根据实验分组用工具细胞进行micRNA与构建的psiCheck2质粒共转染

 

　　培养24小时后，进行双荧光素酶报告基因检测

 

　　结果处理，最终提供详细的实验报告。

 

　　样本要求1、客户需提供详细的实验背景资料。包括实验目的，实验分组等。

 

　　2、客户需提供实验所需的所有质粒或micRNA mimics。质粒浓度需大于400ng/uL，总量大于25uL，且无内毒素，提供的质粒需要有近期的测序报告。如没有测序报告，则需另外提供20uL质粒供测序验证；micRNA mimics浓度为20uM，总量大于25uL。

 

　　3、如果客户需要在指定细胞中进行实验，则需要提供相应细胞，细胞需生长状况良好，同时提供细胞特性，培养条件及相关注意事项。

 

　　4、本公司常备DMEM/F-12 1:1、DMEM(H)和RPMI-1640培养基，如细胞需要用其它培养基，则需要客户提供培养基。

 

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