miRNA RT qPCR检测

　　实验介绍MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex,RISC），通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。它的表达量分析是生物功能研究的基础，细胞、组织或血液中miRNA表达谱的检测，可协助研究信号通路相关miRNA及其靶基因miRNA表达定量分析是生物功能研究的基础。细胞、组织或血液中的miRNA表达谱的检测，可协助研究信号通路相关miRNA及其靶基因。

 

　　交付结果：实验报告，样本返还

 

　　质量保证：客观、公正、可信数据结果

 

　　交付时间：大约5-10个工作日（根据预实验、样本数量情况决定）

 

　　服务项目： miRNA RT qPCR检测（茎环法）

 

　　miRNA qPCR引物引物设计、合成、含验证

 

　　1、相对定量：以U6等为内参，检测样本中相关miRNA的表达量。

 

　　2、绝对定量：以化学合成的miRNA成熟链为标准品，做5个梯度点以上的稀释后制作定量标准曲线，通过标准曲线对待检测miRNA进行绝对定量。

 

　　服务流程1、 依据客户要求用茎环法设计合成引物（含验证）

 

　　2、 标准品制备:只针对于绝对定量，相对定量多种内参可供选择（如：U6，mir-16）

 

　　3、 RNA提取及RNA质量分析：采用Invitrogen的TRIzol 进行裂解提取，RNA提取质量有琼脂糖凝胶电泳及分光光度计双重质控

 

　　4、 逆转录：严格按照fermentas的反转录试剂盒要求抽取质控合格的RNA，并且采用基因特异性引物进行反转录

 

　　5、 预实验验证样品和引物：依据客户选定内参及基因，对客户全部样本内参及个别样本基因进行验证，以确保样本的反转录情况及基因的设计

 

　　6、 正式实验：在以上所有质控合格的情况下，每个样本每个基因进行四个复孔的重复检测，确保至少提供三个复孔Ct≤0.5的数据

 

　　7、 实验报告：提供详细的实验报告，包括RNA提取电泳图、扩增曲线、溶解曲线及数据结果分析

 

　　样本要求细胞（≥106个）：必须是活细胞，贴壁或悬浮均可

 

　　组织（≥50mg）:尽量新鲜并且切取之后立即置于液氮或-80℃保存

 

　　石蜡切片（≥10张）：厚度10-20μm，石蜡组织块或固定组织均可

 

　　全血（2ml以上）：抗凝管4℃运输，短期保存，分离后血清亦可

 

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