Co-IP免疫共沉淀

　　实验介绍免疫沉淀是纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与蛋白裂解液的蛋白结合后，与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。

 

　　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

 

　　服务项目

 

　　服务流程1、接收样本以及抗体，具体实验方案。

 

　　2、预实验确定样本中蛋白表达以及抗体效价。

 

　　3、正式实验。5-10个工作日内完成，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少相应变化。

 

　　4、出具实验报告，提供原始扫描图片。

 

　　样本要求可以接收样本有：细胞样本，样本来源为人和大小鼠。

 

　　1、客户已冻存样本对实验有影响，不建议提供已经冻存样本。

 

　　2、客户提供细胞样本

 

　　1）、细胞状态良好， 保证运输到实验室的细胞为活细胞。

 

　　2）、每个实验组细胞数量保证大于107以上，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少细胞要求数量会相应变化。

 

　　3、其他

 

　　1）、组织样本蛋白的提取根据具体情况制定方案。

 

　　2）、特殊样本：血清、细胞培养上清、非实验室常规来源样本（狗、猪、猴等）等，根据具体情况制定不同实验方案。

 

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