甲基化检测（MSP/BSP/qMSP/HRM）

　　实验介绍DNA甲基化在人的正常发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病（如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等）过程中发挥重要作用，已经成为表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容。 DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式，它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase，Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应，它并不改变DNA的一级结构，却在细胞的发育、基因的表达、及基因组的稳定性中起着重要的作用。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普遍现象，而启动子CpG岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种机制。 因此，基因启动子甲基化检测在临床诊断（如甲基化检测与低剂量CT相结合）、药物敏感性检测等方面具有很高的应用价值。

 

　　服务项目依据实验目的及用途的不同，本公司可做以下几种服务：

 

　　1> MSP：甲基化定性分析

 

　　2> qMSP：对于验证的CpG Island，进行稳定的高度定量和灵敏的甲基化检测分析

 

　　3> BSP：甲基化克隆测序分析，一般挑选10-15个克隆进行测序分析，一般可以提供≥10个测序结果

 

　　4> HRM：高分辨率溶解曲线进行甲基化分析

 

　　交付结果：实验报告、返还样本及产物

 

　　质量保证：客观、公正、可信数据结果

 

　　交付时间：大约10-15个工作日（根据预实验、样本数量情况决定）

 

　　服务流程1、 依据客户提供的基因及下游实验，设计合成相应引物

 

　　2、 DNA提取与质量分析

 

　　3、 亚硫酸盐修饰即CT转换

 

　　4、 预实验验证引物，优化PCR条件

 

　　5、 MSP：普通PCR产物电泳

 

　　qMSP：选择合适的内参及优化后的引物，进行荧光定量PCR

 

　　BSP：对普通PCR获得的产物进行纯化，TA克隆，挑选10-15个克隆进行测序，提供≥10个测序成功结果

 

　　HRM：选择优化后的引物，进行荧光定量PCR

 

　　6、对实验结果进行分析，撰写详细实验报告，包括引物序列，包括DNA提取方法、DNA电泳图、普通PCR电泳图、qPCR扩增曲线、溶解曲线、院士程序、菌液PCR电泳图、测序原始文件及测序结果分析，以及最终的甲基化程序分析。

 

　　样本要求可用于提取基因组的实验材料，如细胞（≥105个）、组织（≥50mg）

 

　　实验周期：10-15个工作日（根据预实验、样本数量、基因情况决定）

 

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